教養教育院 統括部 兼任教員

2023/05/01 更新
工学博士 ( 1992年12月 東京大学 )
工学修士 ( 東京大学 )
抗体工学
無細胞蛋白質合成系
蛋白質工学
酵素
無細胞タンパク質合成系
抗体
ハイスループットスクリーニング
その他 / その他 / 生物・生体工学
ものづくり技術(機械・電気電子・化学工学) / バイオ機能応用、バイオプロセス工学
無細胞蛋白合成系に関する研究
無細胞蛋白質合成系を用いたヒトB細胞からのモノクローナル抗体合成法の開発と応用
無細胞タンパク質合成系を利用した新機能タンパク質の創製
タンパク質工学
タンパク質のナノスケール配置技術の開発
名古屋大学 役員等 総長補佐
2016年8月 - 2618年3月
名古屋大学大学院生命農学研究科・教授
2005年4月
国名:日本国
名古屋大学農学部 助教授
1995年5月 - 2005年3月
国名:日本国
名古屋大学農学部 助手
1991年1月 - 1995年12月
国名:日本国
東京大学 工学系研究科 化学工学
- 1991年
国名: 日本国
東京大学 工学部 化学工学科
- 1985年
国名: 日本国
日本農芸化学会 理事
2021年5月 - 現在
日本生物工学会 理事
2015年5月 - 2021年4月
日本農芸化学会 中部支部庶務幹事
2000年4月 - 2003年3月
日本化学工学会 中部支部庶務幹事
1996年4月 - 1999年3月
日本農芸化学会 中部支部庶務幹事
1996年4月 - 1999年3月
日本分子生物学会
日本農芸化学会 中部支部副支部長
Leucine Zipper fused Fab; Enhancement of active Fab formation in E. coli in vitro and in vivo expression systems 査読有り
Ojima-Kato Teruyo, Fukui Kansuke, Kojima Takaaki, Nakano Hideo
PROTEIN SCIENCE 24 巻 頁: 194-194 2015年10月
Ultra-High-Throughput Screening of an In Vitro-Synthesized Horseradish Peroxidase Displayed on Microbeads Using Cell Sorter 査読有り
Zhu Bo, Mizoguchi Takuro, Kojima Takaaki, Nakano Hideo
PLOS ONE 10 巻 ( 5 ) 2015年5月
Immobilization of proteins onto microbeads using a DNA binding tag for enzymatic assays 査読有り
Kojima Takaaki, Mizoguchi Takuro, Ota Eri, Hata Jumpei, Homma Keisuke, Zhu Bo, Hitomi Kiyotaka, Nakano Hideo
JOURNAL OF BIOSCIENCE AND BIOENGINEERING 121 巻 ( 2 ) 頁: 147-153 2016年2月
In vitro generation of rabbit anti-Listeria monocytogenes monoclonal antibody using single cell based RT-PCR linked cell-free expression systems 査読有り
Ojima-Kato Teruyo, Hashimura Dai, Kojima Takaaki, Minabe Shiori, Nakano Hideo
JOURNAL OF IMMUNOLOGICAL METHODS 427 巻 頁: 58-65 2015年12月
Construction of a DNA Library on Microbeads Using Whole Genome Amplification 査読有り
Kojima Takaaki, Zhu Bo, Nakano Hideo
WHOLE GENOME AMPLIFICATION: METHODS AND PROTOCOLS 1347 巻 頁: 87-100 2015年
Bio-nanocapsules for oriented immobilization of DNA aptamers on aptasensors 査読有り
Iijima Masumi, Yamada Yuki, Nakano Hideo, Nakayama Tsutomu, Kuroda Shun'ichi
ANALYST 147 巻 ( 3 ) 頁: 489 - 495 2022年1月
無細胞タンパク質合成系を利用した迅速抗体スクリーニング技術開発と実用化 招待有り
加藤晃代, 中野秀雄, 兒島孝明, 永井里美
日本生物工学会会誌 99 巻 ( 2 ) 頁: 62 - 67 2021年2月
Ojima-Kato T., Nakano H., Kojima T., Nagai S.
Seibutsu-kogaku Kaishi 99 巻 ( 2 ) 頁: 62 - 67 2021年
Administration of Aspergillus oryzae suppresses DSS-induced colitis 国際誌
Nomura Ryo, Tsuzuki Sho, Kojima Takaaki, Nagasawa Mao, Sato Yusuke, Uefune Masayoshi, Baba Yasunori, Hayashi Toshiya, Nakano Hideo, Kato Masashi, Shimizu Motoyuki
FOOD CHEMISTRY: MOLECULAR SCIENCES 4 巻 頁: 100063 - 100063 2022年7月
Structures of an engineered phospholipase D with specificity for secondary alcohol transphosphatidylation: Insights into plasticity of substrate binding and activation. 招待有り 査読有り 国際共著
Samantha, A., Damnjanović, J., Iwasaki, Y., Nakano, H., and Vrielink, A.
Biochemical Journal 478 巻 頁: 1749 - 1767 2021年5月
Zhu Bo, Gan Rui, Cabezas Maria D., Kojima Takaaki, Nicol Robert, Jewett Michael C., Nakano Hideo
BIOTECHNOLOGY AND BIOENGINEERING 117 巻 ( 12 ) 頁: 3849 - 3857 2020年12月
Sila-on Daorung, Chertchinnapa Phornnaphat, Shinkai Yusuke, Kojima Takaaki, Nakano Hideo
JOURNAL OF BIOSCIENCE AND BIOENGINEERING 130 巻 ( 2 ) 頁: 217 - 225 2020年8月
A simple, real-time assay of horseradish peroxidase using biolayer interferometry
Kojima Takaaki, Nakane Ayako, Zhu Bo, Alfi Almasul, Nakano Hideo
BIOSCIENCE BIOTECHNOLOGY AND BIOCHEMISTRY 83 巻 ( 10 ) 頁: 1822 - 1828 2019年10月
Alfi Almasul, Zhu Bo, Damnjanovic Jasmina, Kojima Takaaki, Iwasaki Yugo, Nakano Hideo
JOURNAL OF BIOSCIENCE AND BIOENGINEERING 128 巻 ( 3 ) 頁: 290 - 295 2019年9月
Oka Hiroya, Kojima Takaaki, Ihara Kunio, Kobayashi Tetsuo, Nakano Hideo
BMC GENOMICS 20 巻 ( 1 ) 頁: 16 2019年1月
Damnjanovic Jasmina, Nakano Hideo, Iwasaki Yugo
PROTEIN ENGINEERING DESIGN & SELECTION 32 巻 ( 1 ) 頁: 1 - 11 2019年1月
Ritthisan Panwad, Ojima-Kato Teruyo, Damnjanovic Jasmina, Kojima Takaaki, Nakano Hideo
JOURNAL OF BIOSCIENCE AND BIOENGINEERING 126 巻 ( 6 ) 頁: 705 - 709 2018年12月
Rapid Generation of Monoclonal Antibodies from Single B Cells by Ecobody Technology.
Ojima-Kato T, Morishita S, Uchida Y, Nagai S, Kojima T, Nakano H
Antibodies (Basel, Switzerland) 7 巻 ( 4 ) 2018年11月
Kojima Takaaki, Hata Jumpei, Oka Hiroya, Hayashi Kenta, Hitomi Kiyotaka, Nakano Hideo
BIOSCIENCE BIOTECHNOLOGY AND BIOCHEMISTRY 82 巻 ( 11 ) 頁: 1911 - 1921 2018年11月
Zipbodyzyme: Development of new antibody-enzyme fusion proteins.
Mori A, Ojima-Kato T, Kojima T, Nakano H
Journal of bioscience and bioengineering 2018年2月
Pilot-scale whole-cell biocatalysis for the hydroxylation of cyclosporine derivative, FR901459, at higher concentrations by Lentzea sp 7887 using soybean flour as a novel substrate dispersant
Yabutani Tetsuya, Shimizu Shiho, Nakano Hideo
JOURNAL OF BIOSCIENCE AND BIOENGINEERING 123 巻 ( 1 ) 頁: 56 - 62 2017年1月
'Zipbody' leucine zipper-fused Fab in E-coli in vitro and in vivo expression systems
Ojima-Kato Teruyo, Fukui Kansuke, Yamamoto Hiroaki, Hashimura Dai, Miyake Shiro, Hirakawa Yuki, Yamasaki Tomomi, Kojima Takaaki, Nakano Hideo
PROTEIN ENGINEERING DESIGN & SELECTION 29 巻 ( 4 ) 頁: 149-157 2016年4月
Handmade microfluidic device for biochemical applications in emulsion
Murzabaev Marsel, Kojima Takaaki, Mizoguchi Takuro, Kobayashi Isao, DeKosky Brandon J., Georgiou George, Nakano Hideo
JOURNAL OF BIOSCIENCE AND BIOENGINEERING 121 巻 ( 4 ) 頁: 471-476 2016年4月
Directing positional specificity in enzymatic synthesis of bioactive 1-phosphatidylinositol by protein engineering of a phospholipase D 査読有り
Damnjanovic Jasmina, Kuroiwa Chisato, Tanaka Hidetoshi, Ishida Ken, Nakano Hideo, Iwasaki Yugo
BIOTECHNOLOGY AND BIOENGINEERING 113 巻 ( 1 ) 頁: 62-71 2016年1月
Signal peptide optimization tool for the secretion of recombinant protein from Saccharomyces cerevisiae 査読有り
Mori Akihiro, Hara Shoichi, Sugahara Tomohiro, Kojima Takaaki, Iwasaki Yugo, Kawarasaki Yasuaki, Sahara Takehiko, Ohgiya Satoru, Nakano Hideo
JOURNAL OF BIOSCIENCE AND BIOENGINEERING 120 巻 ( 5 ) 頁: 518-525 2015年11月
Role of disulfide bond isomerase DsbC, calcium ions, and hemin in cell-free protein synthesis of active manganese peroxidase isolated from Phanerochaete chrysosporium 査読有り
Ninomiya Ryoko, Zhu Bo, Kojima Takaaki, Iwasaki Yugo, Nakano Hideo
JOURNAL OF BIOSCIENCE AND BIOENGINEERING 117 巻 ( 5 ) 頁: 652-657 2014年5月
Deletion of a Dynamic Surface Loop Improves Stability and Changes Kinetic Behavior of Phosphatidylinositol-Synthesizing Streptomyces Phospholipase D 査読有り
Damnjanovic Jasmina, Nakano Hideo, Iwasaki Yugo
BIOTECHNOLOGY AND BIOENGINEERING 111 巻 ( 4 ) 頁: 674-682 2014年4月
A chromogenic substrate for solid-phase detection of phospholipase A(2) 査読有り
Eba Chisato, Okano Aoi, Nakano Hideo, Iwasaki Yugo
ANALYTICAL BIOCHEMISTRY 447 巻 頁: 43-45 2014年2月
Comprehensive Analysis of the DNA-Binding Specificity of an Aspergillus nidulans Transcription Factor, AmyR, by using a Bead Display System. 査読有り
Wang, P., Kojima, T., Kobayashi, T. and Nakano, H.
J. Biosci. Biotechnol. Biochem. 76 巻 ( 1 ) 頁: 1128-1134 2012年6月
Comprehensive Analysis of the DNA-Binding Specificity of an Aspergillus nidulans Transcription Factor, AmyR, Using a Bead Display System
Wang Panhui, Kojima Takaaki, Kobayashi Tetsuo, Nakano Hideo
BIOSCIENCE BIOTECHNOLOGY AND BIOCHEMISTRY 76 巻 ( 6 ) 頁: 1128-1134 2012年6月
Emulsion Culture: A Miniaturized Library Screening System Based on Micro-droplets in an Emulsified Medium. 査読有り
Kojima, T., Nagao, N., Ando, D., Ojima, T., Kawarasaki, Y., Kobayashi, I., Nakajima, M. and Nakano, H.
J. Biosci. Bioeng. 112 巻 頁: 299-303 2011年6月
GLOBE:Analysis of DNA-Protein Interaction Analysis. 招待有り
Kojima, T. and Nakano, H.
Methods in Molecular Biology, 687 巻 頁: 307-317 2011年
High-throughput Screening of DNA Binding Sites for Transcription Factor AmyR from Aspergillus nidulans Using DNA Beads Display System. 査読有り
Kojima, T., Hashimoto, Y., Kato, M., Kobayashi, T. and Nakano, H.
J. Biosci. Bioeng. 109 巻 ( 6 ) 頁: 519-525. 2010年6月
High-throughput screening of DNA binding sites for transcription factor AmyR from Aspergillus nidulans using DNA beads display system
Kojima Takaaki, Hashimoto Yoko, Kato Masashi, Kobayashi Tetsuo, Nakano Hideo
JOURNAL OF BIOSCIENCE AND BIOENGINEERING 109 巻 ( 6 ) 頁: 519-525 2010年6月
(2010) Directed Evolution of Angiotensin II-inhibiting Peptides Using Microbeads Display. 査読有り
Gan, R., Furuzawa, S., Kojima, T., Kanie, K., Kato, R., Okochi, M., Honda, H. and Nakano, H.
J. Biosci. Bioeng. 109 巻 ( 4 ) 頁: 411-417 2010年4月
Synthesis of phosphatidylinositols having various inositol stereoisomers by engineered phospholipase D 査読有り
Akari Ozaki, Atsushi Masayama, Hideo Nakano, Yugo Iwasaki
J. Biosci. Bioeng. 109 巻 頁: 337-340 2010年4月
(2010) In vitro generation of anti-hepatitis B monoclonal antibodies from a single plasma cell using single-cell RT-PCR and cell-free protein synthesis. 査読有り
Sabrina, Y., Ali, M. and Nakano, H.
J. Biosci. Bioeng. 109 巻 ( 1 ) 頁: 75-82 2010年1月
*Microbeads display of proteins using emulsion PCR and cell-free protein synthesis. 査読有り
Gan, R, Yamanaka, Y, Kojima, T, and Nakano, H.
Biotechnol. Prog. 24 巻 頁: 1107-1114 2008年1月
Streptomyces phospholipase D mutants with altered substrate specificity capable of phosphatidylinositol synthesis. 査読有り
Masayama, A., Takahashi, T., Tsukada, K., Nishikawa, S., Takahashi, R., Adachi, M., Koga, K., Suzuki, A., Yamane T., Nakano, H., and Iwasaki, Y.
Chembiochem 9 巻 頁: 974-981 2008年1月
Direct separation of monoacylglycerol isomers by enantioselective high-performance liquid chromatography. 査読有り
Deng, L., Nakano, H. and Iwasaki, Y.
J. Chromatogr. A. 1198-1199 巻 頁: 67-72 2008年1月
Direct separation of regioisomers and enantiomers of monoacylglycerols by tandem column high-performance liquid chromatography
Deng Li, Nakano Hideo, Iwasaki Yugo
JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY A 1165 巻 ( 1-2 ) 頁: 93-99 2007年9月
無細胞タンパク質合成系を用いた進化分子工学システムの構築と応用.
兒島孝明,中野秀雄
生化学 79 巻 頁: 239 -246 2007年4月
Development and application of evolutionary molecular engineering systems using cell-free protein synthesis
Kojima Takaaki, Nakano Hideo
SEIKAGAKU 79 巻 ( 3 ) 頁: 239-246 2007年3月
Direct separation of regioisomers and enantiomers of monoacylglycerols by tandem column high-performance liquid chromatography. 査読有り
Deng, L., Nakano, H. and Iwasaki, Y.
J. Chromatogr. 1198-1199 巻 頁: 93-99 2007年1月
Creation of novel enantioselective lipases by SIMPLEX. 招待有り
Koga, Y., Yamane, T. and Nakano, H.
Methods Mol. Biol. 375 巻 頁: 165-182 2007年1月
SIMPLEX: single-molecule PCR-linked in vitro expression: a novel method for high-throughput construction and screening of protein libraries. 招待有り
Rungpragayphan, S., Yamane, T. and Nakano, H.
Methods Mol. Biol. 375 巻 頁: 79-94 2007年1月
微細形状を利用した高速高感度免疫化学検出 査読有り
吉村千里、中野秀雄
電気化学界論文誌E 126 巻 ( 8 ) 頁: 486-491 2006年8月
In vitro selection of DNA binding sites for transcription factor, PhaR, from Paracoccus denitrificans using genetic library on microbeads and flow cytometry
Kojima Takaaki, Yamane Tsuneo, Nakano Hideo
JOURNAL OF BIOSCIENCE AND BIOENGINEERING 101 巻 ( 5 ) 頁: 440-444 2006年5月
Generation of Monoclonal Antibodies Using Simplified Single-Cell Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction and Cell-Free Protein Synthesis. 査読有り
Muhamad Ali, Hitomi, K. and Nakano, H.
Journal of Bioscience and Bioengineering, 101, 巻 頁: 284-286 2006年4月
*A Novel Strategy for Generation of Monoclonal Antibodies from Single B Cells Using RT-PCR Technique and in Vitro Expression. 査読有り
XiuPing Jiang, Suzuki, H., Hanai, Y., Wada, F., Hitomi, K., Yamane, T. and Nakano, H.
Biotechnol. Prog. 22 巻 頁: 979-988 2006年4月
In vitro selection of DNA binding sites for transcription factor, PhaR, from Paracoccus denitrificans using genetic library on microbeads and flow cytometry. 査読有り
Kojima, T., Yamane, T. and Nakano, H.
Journal of Bioscience and Bioengineering 101 巻 頁: 440-444. 2006年3月
Improvements in the cell-free production of functional antibodies using cell extract from protease-deficient Escherichia coli mutant. 査読有り
Muhamad Ali, Suzuki, H., Fukuba, T., Jiang, X., Nakano, H. and Yamane, T.
Journal of Bioscience and Bioengneering 99 巻 頁: 181-186. 2005年
Novel Strategy for Protein Exploration: High-throughput Screening Assisted with Fuzzy Neural Network, 査読有り
R. Kato, H. Nakano, H. Konishi, K. Kato, Y. Koga, T. Yamane, T. Kobayashi and H. Honda
Journal of Molecular Biology 35 巻 ( 3 ) 頁: 683-692 2005年
*PCR amplification from single DNA molecules on magnetic beads in emulsion: application for high-throughput screening of transcription factor targets, 査読有り
T. Kojima, Y. Takei, M. Ohtsuka, Y. Kawarasaki, T. Yamane, and H. Nakano,
Nucleic Acids Research 33 巻 頁: e15 2005年
Mass enhancement cell-free protein synthesis using S30 extract from Escherichia coli growing fast at 42 degrees on amino acid-enriched medium. 査読有り
Yamane, T., Ikeda, Y., Nagasaka, T. and Nakano, H.
Biotechnology Progress 21 巻 頁: 608-613. 2005年
無細胞タンパク質合成系を用いたハイスループットスクリーニング技術の開発と応用
日本農芸化学会誌 78 巻 ( 5 ) 頁: 483-486 2004年
A picoliter chamber array for cell-free protein synthesis 査読有り
Takeshi Kinpara, Ryota Mizuno, Yuji Murakami, Masaki Kobayashi, Shouhei Yamamura, Quamrul Hasan, Yasutaka Morita, Hideo Nakano, Tsuneo Yamane, Eiichi Tamiya
Journal of Biochemistry 136 巻 ( 2 ) 頁: 149-153 2004年
SIMPLEX法によるリパーゼのタンパク質工学
山根恒夫、中野秀雄
日本農芸化学会誌 78 巻 頁: 751-753 2004年
Rapid screening for affinity-improved scFvs by means of single-molecule-PCR-linked in vitro expression. 査読有り
Rungpragayphan, S., Haba, M., Nakano, H. and Yamane, T.
Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic, 28 巻 頁: 223-228 2004年
Cell-free protein synthesis systems: Increasing their performance and applications.
Nakano, H., Kawarasaki, Y., Yamane, T.
Advances in Biochemical Engineering/Biotechnology 90 巻 頁: 135-149 2004年
SIMPLEX法によるタンパク質ライブラリーの構築 招待有り
科学と工業 78 巻 ( 6 ) 頁: 316-321 2004年
*Inverting enantioselectivity of Burkholderia cepacia KWI-56 lipase by combinatorial mutation and high-throughput screening using single-molecule PCR and in vitro expression. 査読有り
Journal of Molecular Biology 331 巻 ( 3 ) 頁: 585-592 2003年1月
Improvement of H 2O2stability of manganese peroxidase by combinatorial mutagenesis and high-throughput screening using in vitro expression with protein disulfide isomerase. 査読有り
Protein Engineering 16 巻 ( 6 ) 頁: 423-428 2003年
PCR-linked in vitro expression: a novel system for high-throughput construction and screening of protein libraries. 査読有り
FEBS Lett 540 巻 頁: 147-150 2003年
Cloning and in vitro and in vivo expression of plant glutathione S-transferase zeta class gene. 査読有り
Journal of Bioscience and Bioengineering 95 巻 ( 6 ) 頁: 594-600 2003年
Stabilization of Affinity-Tagged Recombinant Protein during/after Its Production in a Cell-Free System Using Wheat-Germ Extract. 査読有り
Journal of Bioscience and Bioengineering 95 巻 ( 3 ) 頁: 209-214 2003年
*無細胞タンパク質合成系の高度化と応用 招待有り
生物工学会誌 81 巻 ( 2 ) 頁: 71-76 2003年
High-throughput, cloning-independent protein library construction by combining single-molecule DNA amplification with in vitro expression. 査読有り
Journal of Molecular Biology 318 巻 頁: 395-405 2002年
In vitro combinatorial mutagenesis of the 65th and 22nd positions of the green fluorescent protein of Aequarea victoria. 査読有り
Biotechnology and Bioprocess Engineering 7 巻 頁: 1-6 2002年
Modifying the chain length selectivity of the lipase from Burkholderia cepacia KWI-56 through in vitro combinatorial mutagenesis in the substrate binding site. 査読有り
Protein Engineering 15 巻 頁: 147-152 2002年
Reduction of protein degradation by use of protease-deficient mutants in cell-free protein synthesis system of Escherichia coli. 査読有り
Journal of Bioscience and Bioengineering 93 巻 ( 2 ) 頁: 151-156 2002年
In vitro construction and screening of Burkholderia cepacia lipase library using single-molecule PCR and cell-free protein synthesis. 査読有り
Journal of Bioscience and Bioengineering 94 巻 ( 1 ) 頁: 84-86 2002年
Expression of Fab fragment of catalytic antibody 6D9 in an Escherichia coli in vitro coupled transcription/translation system. 査読有り
FEBS Letters, 514 巻 頁: 290-294 2002年
無細胞蛋白質合成系による新機能分子の創出
化学と生物 40 巻 ( 8 ) 頁: 533-538 2002年
無細胞タンパク質合成系の進歩と応用
現代化学 370 巻 頁: 66-72 2002年
無細胞系によるタンパク質創製システム
バイオインダストリー 18 巻 ( 6 ) 頁: 42-48 2001年
PhaR, a protein of unknown function conserved among short-chain-length polyhydroxyalkanoic acids producing bacteria, is a DNA-binding protein and represses Paracoccus denitrificans phaP expression in vitro. 査読有り
FEMS Microbiol Lett. 200 巻 ( 1 ) 頁: 9-15 2001年
Dosage effect of minor arginyl- and isoleucyl-tRNA on protein synthesis in an E.coli in vitro coupled transcription/translation system. 査読有り
Journal of Bioscience and Bioengineering 91 巻 ( 1 ) 頁: 53-57 2001年
"Good-bye“大腸菌"":無細胞タンパク質合成系の挑戦" 招待有り
中野秀雄
バイオサイエンスとインダストリー 58 巻 頁: 11-15 2000年1月
A trimmed virul cap-independent translation enhancing sequence for rapid in vitro gene expression.
"Kawarasaki,Y. Kasahara,S., Kodera,N., Shinbata,T., Sekiguchi,S., Nakano, H.,and Yamane"
Biotechnology Progress 16 巻 頁: 517-521 2000年1月
Importance of disulfide bridge formation on folding of phospholipase D from Streptomyces antibioticus. 査読有り
Journal of Bioscience and Bioengineering 89 巻 ( 5 ) 頁: 506-508 2000年
Single-step Single-Molecule PCR of DNA with a homo-priming sequence using a single primer and hot-startable DNA polymerase 査読有り
Journal of Bioscience and Bioengineering 90 巻 頁: 456 2000年
In vitro analysis of roles of a disulfied bridge and a calcium binding site in activation of Pseudomonas sp. strain KWI-56 lipase. 査読有り
Journal of Bacteriology 182 巻 頁: 295-302 2000年
Amalyses of a polybydroxy alkanoic acid granule-associated 16-kilodalton protein and its patatire regulator in the pha locus of Paracoccus denitrificans. 査読有り
Journal of Bacteriology 121 巻 ( 9 ) 頁: 2914-2921 1999年
Efficient coupled transcrption /trornslation for PCR template by a hollow fiber membra in bioreactar. 査読有り
Biotechnology and Bioengineering 64 巻 ( 2 ) 頁: 194-199 1999年
Modulator-mediated synthesis of active lipase of Pseudomonas sp. 109 by Escherichia coli cell-free coupled transcription/translation system. 査読有り
Journal of Bioscience and Bioengineering 88 巻 頁: 605-609 1999年
Purification, characterization and gene cloning of 6-hydroxy nicotinate 3-monooyygenase from Pseadomonas flaovescene 7N5. 査読有り
European Journal of Biachemistry 260 巻 頁: 120-126 1999年
無細胞たん白質合成 招待有り
山根恒夫、中野秀雄、河原崎泰昌
ケミカル・エンジニアリング 43 巻 頁: 198-206 1998年1月
Two distinct phosphatidylinositol-specific phospholipase Cs from Streptomyces antibioticus.
"Iwasaki, Y., Tsubouchi, Y., Ichihashi, A., Nakano, H., Kobayashi, T., Ikezawa, H., and Yamane, T.,"
Biochemica Biophysica Acta 1391 巻 頁: 52-66 1998年1月
In vitro method for the generation of protein libraries using PCR amplification of a single DNA molecule and coupled transciptin /translation. 査読有り
Nucleic Acids Research 26 巻 ( 19 ) 頁: 4339-4346 1998年
Cell-free protein synthesis systems.
Biotechnolosy Advances 16 巻 ( 2 ) 頁: 367-384 1998年
Phosphatase-immunodepleted cell-free protein synthesis system. 査読有り
Journal of Biotechnology 61 巻 頁: 199-202 1998年
Insertion of stabilizing loci in vectors of T7 RNA polymerase-mediated scherichia coliexpression systems: A case study on the plasmids involving foreign phospholipase D gene
"Mishima, N., Mizumoto, K., Iwasaki, Y., Nakano, H. and Yamane, T.,"
Biotechnology Progress 13 巻 頁: 864-868 1997年1月
Accumulation of translational inhibitors during multi-hour cell-free protein synthesis reaction using rabbit reticalocy of lysate. 査読有り
Journal of Fermentation and Bioengineering 83 巻 ( 5 ) 頁: 470-473 1997年
Recent advances in cell-free protein synthesis towards a protein biosynthesizer 招待有り 査読有り
"Nakano, H., Kawarasaki, Y., and Yamane, T."
Enzyme Engineering XIII (The Annals of the New York Academy of Sciences) 799 巻 頁: 406-412 1996年1月
Highly productive cell-free protein synthesis system using coensed wheat-germ extract
"Nakano, H., Tanaka, T., Kawarasaki, Y. and Yamane, T.,"
Journal of Biotechnology 46 巻 頁: 275-282 1996年1月
Highly productive cell-free protein synthesis system using condensed wheat-germ extract. 査読有り
Journal of Biotechnolosy 46 巻 頁: 275-282 1996年
Purification and some properties of serm acid phosphatases. 査読有り
Plant Science 119 巻 頁: 67-77 1996年
無細胞系での蛋白質大量合成に向けて. ―─ 遺伝子翻訳機の構築 ――
中野秀雄、山根恒夫
バイオサイエンスとインダストリー 53 巻 頁: 967-969 1995年1月
A long-lived batch reaction system of cell-free protein synthesis
"Kawarasaki, Y., Kawai, T., Nakano, H. and Yamane, T.,"
Analytical Biochemistry 226 巻 頁: 320-324 1995年1月
n VitroProtein Biosynthesis Using Ribosome and Foreign mRNA - An Approach to Construct a Protein Biosynthesizer - 招待有り
"Yamane, T., Kawarasaki, Y. and Nakano, H."
Enzyme Engineering XII (The Annals of the New York Academy of Sciences) 750 巻 頁: 146-157 1995年1月
A long-lived batch reaction system of cell free protein synthsis. 査読有り
Analytical Biochemistry 226 巻 ( 2 ) 頁: 320-324 1995年
In Vitro Protein Biosynthesis Using Ribosome and Foreign mRNA An Approach to Construct a Protein Biosynthesizer. 査読有り
Enzyme Engineering XII 750 巻 頁: 146-157 1995年
Extracellular production of phospholipase D of Streptmyces antibioticus by recombinant Escherichia coli. 査読有り
Journal of Fermentation and Bioengineering 79 巻 ( 5 ) 頁: 417-421 1995年
High speed polymerase chain reaction in Constant flow. 査読有り
Bioscience, Biotechnology and Biochemistry 58 巻 ( 2 ) 頁: 349-352 1994年
An increased rate of cell-free protein synthesis by condenleing wheat-gem extuet with ultrafiltration menbranes. 査読有り
Bioscience, Biotechnology and Biochemistry 58 巻 ( 4 ) 頁: 631-634 1994年
Role of cystein residues in esterose from Bacillus stearothermophilus and increasing its thermostability by the replacement of cysteine. 査読有り
Applied Microbiology and Biotechnology 40 巻 ( 3 ) 頁: 664-668 1994年
PCRの高速化
中野秀雄、山根恒夫
蛋白質 核酸 酵素 39 巻 頁: 2113-2120 1994年
大腸菌α-ヘモリシンの膜透過機構を用いた細胞質性タンパク質の菌体外分泌 査読有り
化学工学論文集 17 巻 頁: 3 1991年
シグナル配列によらないタンパク質の膜透過系
BIOmedica 6 巻 頁: 186-190 1991年
新版生物反応工学
中野秀雄、岩崎雄吾、山根恒夫、河原崎泰昌、加藤雅士、志水元亭( 担当: 共著)
産業図書株式会社 2016年9月 ( ISBN:978-4-7828-2617-1 C )
Creation of Novel Enantioselective Lipases by SIMPLEX. In Vitro Transcription and Translation Protocols
Koga, Y., Yamane, T. and Nakano, H.( 担当: 共著)
Humana Press, 2007年4月
SIMPLEX: Single-Molecule PCR-Linked In Vitro Expression. In Vitro Transcription and Translation Protocols
Rungpragayphan, S., Yamane, T. and Nakano, H.( 担当: 共著)
Humana Press 2007年4月
酵素の光学選択性に関与する基質認識部位の網羅的解析
中野 秀雄( 担当: 共著)
[出版者不明] 2007年
バイオプロダクション
化学工学会バイオ部会編( 担当: 共著)
コロナ社 2006年5月
SIMPLEX法の開発と進化分子工学への応用. コンビナトリアル・バイオエンジニアリングの最前線 監修植田充美
今村千絵、中野秀雄( 担当: 共著)
シーエムシー出版 2004年
In vitro expression of proteins with disulfide bridges and its application for high-throughput screening system. Cell-free protein expression ed. James R. Swartz
Hideo Nakano and Tsuneo Yamane( 担当: 共著)
Springer 2003年
マイクロリアクタアレイによる超高密度タンパク質・ペプチド分子ライブラリの構築
中野 秀雄( 担当: 共著)
[出版者不明] 2003年
無細胞タンパク質合成系による蛋白質工学. 化学フロンティア「コンビナトリアル・バイオエンジニアリング」( 編:植田充美,近藤昭彦)"
中野秀雄,古賀雄一( 担当: 共著)
化学同人 2002年
無細胞タンパク質合成系の最近の進歩 化学フロンティア『コンビナトリアル・バイオエンジニアリング』植田、近藤編
中野秀雄( 担当: 共著)
化学同人 2002年
日本生化学会編基礎生化学実験法
中野秀雄( 編:)( 担当: 共著)
東京化学同人 2001年
高効率小麦胚芽タンパク質生合成系,
遺伝子発現研究法(学会出版センター) 2000年
無細胞分子進化システムの構築
中野 秀雄( 担当: 共著)
[出版者不明] 1999年
タンパク質生産量を増大させるN末端SKIKペプチドタグ配列に関する研究
古川裕貴, 加藤晃代, 中野秀雄, 中野秀雄
日本農芸化学会中部支部例会講演要旨集(Web)187th 巻 2020年
タンパク質生産量を増大させるN末端SKIKペプチドタグ配列に関する研究
古川裕貴, 加藤晃代, 加藤晃代, 中野秀雄, 中野秀雄
日本生物工学会大会講演要旨集71st 巻 2019年
モノクローナル抗体迅速探索プラットフォーム技術の社会実装
中野秀雄, 中野秀雄, 加藤晃代, 大内将司, 兒島孝明
日本生物工学会大会講演要旨集71st 巻 2019年
再構成型無細胞タンパク質合成系を用いた抗体-酵素融合タンパク質(Zipbodyzyme)の効率的合成
伊藤玲奈, ALMASL Alfi, 加藤晃代, 兒島孝明, 中野秀雄
日本生物工学会大会講演要旨集71st 巻 2019年
麹菌摂取による宿主腸内細菌叢の改善および大腸炎の緩和
兒島孝明, 志水元亨, 馬場保徳, 中野秀雄, 加藤雅士
日本生物工学会大会講演要旨集71st 巻 2019年
シングルB細胞由来モノクローナル抗体の迅速取得と大腸菌による生産
加藤晃代, 兒島孝明, 中野秀雄
日本農芸化学会大会講演要旨集(Web)2018 巻 2018年
シングルB細胞由来モノクローナル抗体の迅速取得と大腸菌による生産
加藤晃代, 兒島孝明, 田村廣人, 中野秀雄
化学工学会秋季大会研究発表講演要旨集(CD-ROM)49th 巻 2017年
モノクローナル抗体取得技術の新展開 より良い抗体をより早く
加藤晃代, 加藤晃代, 中野秀雄
化学と生物55 巻 ( 7 ) 2017年
大腸菌発現システムを用いたシングルヒトB細胞からの抗乳酸菌ヒトモノクローナル抗体取得
内田由乃, 加藤晃代, 兒島孝明, 中野秀雄
日本農芸化学会大会講演要旨集(Web)2017 巻 2017年
無細胞タンパク質合成系を用いたモノクローナル抗体ハイスループットスクリーニング技術の開発と社会実装 招待有り
Hideo Nakano
日本ビタミン学会第72回大会 2020年9月1日 日本ビタミン学会
In vitro generation of Hepatitis B Monoclonal Antibody From Single Plasma Cells.
Yunita Sabrina, Muhamad Ali, and Nakano, H
日本農芸化学会2007年度大会
特定蛋白質間相互作用の選択的破壊法の開発.
池内暁紀,神谷拓摩,山根恒夫,中野秀雄,河原崎泰昌
日本農芸化学会2007年度大会
Direct separation of regio-and enantiomeric isomers of monoglycerides by a tandem column HPLC.
Deng Li, Iwasaki, Y., and Nakano, H.
日本農芸化学会2007年度大会
Microbeads Display of Proteins Using Emulsion PCR and Cell-free Protein Synthesis.
Gan, R, Yamanaka, Y., and Nakano, H.
日本農芸化学会2007年度大会
マイクロチャネル(MC)乳化法を用いたエマルジョンPCRによるマイクロビーズへのDNAライブラリーの構築.
杉浦一輝,小林 功,中嶋光敏,中野秀雄:
日本農芸化学会2007年度大会
Altering substrate specificity of phospholipase D by directed evolution. 国際会議
The Japan-Italy Symposium of New Trends in Enzyme Science and Technology,
Protein engineering of lipase using cell-free protein synthesis system and information technology. 国際会議
Japan-Italy Symposium of New Trends in Enzyme Science and Technology,
Direct separation of regio-and enantiomeric isomers of monoglycerides by a tandem column HPLC.
Deng Li, Iwasaki, Y., and Nakano, H.:
マイクロビーズ上での分子ディスプレイ法を用いたDNA-転写因子複合体検出法.
橋本陽子,兒島孝明,加藤雅士,小林哲夫,中野秀雄
日本農芸化学会中部支部例会
糸状菌β―ガラクトシダーゼをレポーターとする半定量的酵母2ハイブリッド系の開発
小島晃代,神谷拓摩,池内暁紀,中野秀雄,河原崎泰昌
日本農芸化学会中部支部例会
Exploring novel enantio-selective lipases by high-throughput screening with the aid of fuzzy neural network analysis 国際会議
The Ninth Japan-China-Korea Joint Symposium on Enzyme Engineering
Altering substrate specificity of phospholipase D by directed evolution. 国際会議
A Novel Compact Disk-like Microfluidic Device with Micropillars for Enzyme-linked Immunosorbent Assay.
無細胞蛋白質合成系を用いたリパーゼの蛋白質工学
日本生物工学会平成18年度大会,
位置特異的アミノ酸飽和変異による2-デオキシリボース-5-リン酸アルドラーゼの基質特異性改変.
木村昌博,則武智哉,河原崎泰昌,岩崎雄吾,吉田洋一,中野秀雄
日本生物工学会平成18年度大会
特定蛋白質間相互作用の選択的破壊法の開発.
池内暁紀,神谷拓摩,山根恒夫,中野秀雄,河原崎泰昌
日本生物工学会平成18年度大会
フローサイトメトリーを用いた転写因子AmyR-DNA複合体の検出法。
橋本陽子、兒島孝明、加藤雅士、小林哲夫、中野秀雄
日本農芸化学会2006年度大会
無細胞タンパク質合成系の高度化と応用
中野秀雄
日本農芸化学会2006年度大会
ホスファチジルイノシトール合成活性を有する変異型ホスホリパーゼDの創製。
高橋哲也、山根恒夫、中野秀雄、岩崎雄吾
日本農芸化学会2006年度大会
エマルジョンPCRを用いたマイクロビーズ上での分子ディスプレイ法の開発
山中友美子、兒島孝明、山根恒夫、中野秀雄
日本農芸化学会2006年度大会
Protein-protein interaction network in Yeast kinetochore.
糸状菌β-ガラクトシダーゼを相互作用レポーターとする半定量的酵母2ハイブリッド系の開発。
小島晃代、河原崎泰昌、神谷拓摩、池内暁紀、中野秀雄
日本農芸化学会2006年度大会
:Exhaustive identification of interaction domains using a novel high-throughput method: The first step toward interaction targeting. 国際会議
PACIFICHEM 2005
Novel techniques using PCR and cell-free protein synthesis systems for combinatorial bioengineering. 国際会議
PACIFICHEM 2005
PCR amplification from single DNA molecule on magnetic bead in emulsion: Application for high-throughput screening of transcription factor targets. 国際会議
PACIFICHEM 2005
Enzymatic preparation of enantiomerically pure2,3-diacylglycerol.
構造脂質の酵素合成
岩崎雄吾、ピヤティラウォンウィーラ、中野秀雄、山根恒夫:
日本生物工学会平成17年度大会
進化工学的手法を用いた出芽酵母キネトコアDam1複合体のサブユニット間相互作用領域の同定
神谷拓摩、池内暁紀、河原崎泰昌、中野秀雄、山根恒夫
日本生物工学会平成17年度大会
Generation and Screening of Monoclonal Antibodies Using Single-Step Single Cell RT-PCR linked in vitro Expression
Muhamad Ali, Hitomi, K., and Nakano, H.
日本生物工学会平成17年度大会
W/Oエマルジョン内での固相1分子PCR無細胞蛋白質合成系を用いた蛋白質間相互作用検出法の開発。
山中友美子、兒島孝明、山根恒夫、中野秀雄
日本生物工学会平成17年度大会
マイクロビーズ上での遺伝子ライブラリーを用いたDNA 結合タンパク質の結合DNA領域のハイスループットスクリーニング法の開発。
兒島孝明、武井義明、山根恒夫、中野秀雄
日本生物工学会平成17年度大会
位置特異的アミノ酸飽和変異による2-デオキシリボース-5-リン酸アルドラーゼの基質特異性改変(2)。
木村昌博、則武智哉、河原崎泰昌、岩崎雄吾、吉田洋一、中野秀雄
日本生物工学会平成17年度大会
: Generation and Screening of Monoclonal Antibodies Using Single-Step Single Cell RT-PCR linked in vitro Expression.
A novel approach for generation and screening of monoclonal antibody by single cell RT-PCR and in vitro expression.
W/Oエマルジョン内1分子固相PCR法の開発。
武井義明、兒島孝明、民谷栄一、山根恒夫、中野秀雄
日本農芸化学会2005年度大会
ビーズディスプレイ法によるDNA結合タンパク質の結合DNA領域のスクリーニング法の開発。
兒島孝明、武井義明、山根恒夫、中野秀雄
日本農芸化学会2005年度大会
有機鎖修飾メソポーラスシリカに固定化されたリパーゼの活性安定性。
森岡幸、加藤且也、斎藤隆雄、Sindhu Seelan、横川善之、高橋治雄、中野秀雄、山根恒夫
第8回生体触媒化学シンポジウム
中野秀雄、山根恒夫:SIMPLEX法による新規蛋白質の創製。
第27回日本分子生物学会年会
Exploring novel enantio-selective lipases by high-throughput screening with the aid of fuzzy neural network analysis. 国際会議
The 10th APCChe congress
SIMPLEXを用いた新規単鎖抗体ライブラリーの構築とスクリーニング
山中友美子、Rungpragayphan Suang、円谷 健、藤井郁雄、中野秀雄、山根恒夫
日本生物工学会平成16年度大会
SIMPLEX法により得られた光学選択性の反転した変異リパーゼ群の解析
加賀哲也、中野秀雄、小西宏幸、古賀雄一、加藤克也、山根恒夫
日本生物工学会平成16年度大会
Creation of novel proteins by SIMPLEX. 国際会議
3rd Japan-Korea Workshop on Molecular Display,
免疫学的食中毒菌迅速検出法の開発
2010年7月 - 現在
出資金による受託研究
酵素リアクターにおけるバイオマス分解酵素の進化分子工学による高機能化研究開発
2008年4月 - 2011年3月
資金種別:競争的資金
申請者らが独自に開発したビーズディスプレイ法等を用いてセルラーゼの高機能化を目指す。
進化分子工学によるバイオマス糖化酵素の高機能化
2006年6月 - 2008年3月
企業からの受託研究
遺伝子工学的手法を用いた酵素の機能改変
2005年4月 - 2006年3月
企業からの受託研究
免疫反応検出用マイクロディバイスの研究開発
2004年4月 - 2005年3月
企業からの受託研究
革新的機能的ヒト抗体配列ーエピトープのハイスループット解析技術開発
研究課題/研究課題番号:22K18919 2022年6月 - 2025年3月
科学研究費助成事業 挑戦的研究(萌芽)
中野 秀雄, ダムナニョヴィッチ ヤスミナ, 兒島 孝明
担当区分:研究代表者
配分額:6500000円 ( 直接経費:5000000円 、 間接経費:1500000円 )
ヒト体内に存在するB細胞が産生する抗体分子は、感染防除や予防、がん細胞除去な どを担う一方、自己免疫疾患やがん細胞増殖にも関わるなど、多面的な機能を有することが知られている。抗体の標的分子は可変領域の配列で決まっているのであるが、その配列と標的であるエピトープを網羅的に解析する手法は存在せず、それらの関係性は不明のままである。本研究では、エマルジョン中での極微細反応場や無細胞タンパク質合成系、さらには次世代シーケンスやバイオインフォマティクスを駆使することで、抗体配列とエピトープを迅速安価に解析する新たな方法論を開発する。
腫瘍微小環境内 B 細胞を用いた転移性脳腫瘍に対する CAR-T 細胞療法の開発
研究課題/研究課題番号:22K09223 2022年4月 - 2025年3月
科学研究費助成事業 基盤研究(C)
大野 真佐輔, 中野 秀雄, 藤田 貢, 山下 公大
担当区分:研究分担者
本研究計画は大きく①転移性脳腫瘍内のTLSおよびTABの検出②新鮮腫瘍組織からのTABのソーティングと抗体情報の抽出③CARの構築と抗腫瘍効果の検証の3つの段階に分かれる。大量の転移性脳腫瘍検体を用いての検索を必要とするため深層学習アルゴリズムを用いたハイスループット画像解析手法を用いてTLSの検出を行い、かつ抗体抽出に最適なTABの選定のための抗体コンビネーションを選定する。続いてEcobody法を用いた新鮮腫瘍組織からのTABの抽出と抗体情報の取得を行う。最後に入手した抗体の情報をもとにCARを構築し、in vitro、動物脳腫瘍モデルを用いた新規CARレパートリーの有効性を検証する
研究課題/研究課題番号:21K08778 2021年4月 - 2024年3月
科学研究費助成事業 基盤研究(C)
松田 武, 掛地 吉弘, 山下 公大, 竹内 俊文, 谷野 裕一, 犬伏 祥子, 向山 順子, 中野 秀雄, 藤田 貢
担当区分:研究分担者
本研究は、Liquid biopsy による原発性大腸癌術後症例の早期再発検出法の開発を目的とし、患者検体の採取および解析手段として涙液由来エクソソーム検出法 (TearExo 法) を用いる。本手法は ①症例検体集積が簡便であり、迅速な前向き研究が実施可能、②エクソソームを確保するための抗体は変更可能で、病態・患者特異的に最適化したエクソソーム解析が可能、等の利点がある。転移臓器別抗体および患者個別抗体によるエクソソームを検出することで、個別検出を目指した次世代型精密医療の基盤構築を試みる。
本研究は、Liquid biopsy による原発性大腸癌術後再発の早期検出法の開発を目的とし、患者検体の採取および解析手段として涙液由来エクソソーム検出法 (TearExo 法) を用いる。これまでの成果と併せて述べると、本手法は①症例検体集積が簡便であり、迅速な前向き研究が実施可能、②エクソソームを確保するための抗体は変更可能で、病態・患者特異的に最適化したエクソソーム解析が可能、等の利点がある。転移臓器別抗体および患者個別抗体によるエクソソームを検出することで、個別検出を目指した次世代型精密医療の基盤構築を試みる。
まず、大腸癌細胞株を用いたエクソソーム検出と確認を行う。採取されたexosomeをmiRNA検出で確認する。大腸癌細胞株由来や大腸癌原発巣切除例組織培養液由来のエクソソームの単球系細胞への影響を検討する。この部分は超遠心とELISA 法で検証する。エクソソームと単球系細胞への影響を検討する。超遠心とELISA 法で検証し、RNAシーケンスを行う。さらに、大腸癌原発巣切除例のエクソソーム検出と定量を行うために、術前後でTearExo 法の検証を行う。さらに、同系が確立されれば、大腸癌同時性肝転移症例、同時性肺転移症例に対するエクソソーム検出とエクソソームの解析を行う。術前後でTearExo 法でのエクソソーム検証を行う。さらに、原発性大腸癌切除例に対するエクソソーム検出例の集積と観察研究を行い、大規模前向き臨床研究へと進めたい。
本研究の成果は、大腸癌の再発の早期検出のみならず、臓器指向性転移の検出方法が期待され、臓器別のフォローを重点的に行うことにより、早期発見と早期治療による治療性の向上を目指すものである。
エクソソーム解析については、超遠視を行い、ウエスタンブロッティング法にで検出法の検証を行なっており、涙を用いた検出が十分可能であり、miRNAの採取が可能であることを確認した。また、大腸癌細胞および単球系細胞の培養液を用いて、エクソソーム検出系を立ち上げた状態である。大腸癌細胞を用いて検出系を確定させ、大腸癌感患者の術前、術後での変化を確認し、バイオマーカーとしての妥当性を喧騒する予定である。また、転移指向性エクソソームの検出は、時間を要する可能性が高く、今後の課題となる可能性があるため、新たなモデル作成が必要である。また、患者臨床検体に採取に関しては、準備が遅延しているため、早急の開始が必要である。さらに、規模を拡大した研究が必要となる可能性が高く、こちらも研究計画を企画している。胃癌腹膜播種症例を用いて腹水による検出も検討している。
医学倫理委員会書類の準備中であるが、これを早急に完成させる。また、実際の採取に関しては、涙のエクソソームの採取の自動化、迅速化を行う。これは、外来スタッフ及び共同研究者らの協力を得て、採取が自動的に蓄積されるようにシステム構築を図り、採取から解析の流れを円滑に行えるようにする。一方、臓器特異的転移のモデルとして、マウス肺転移モデルを作成している。ワクチン治療を行ったモデルを作成し、臓器指向性の転移エクソソームの検出モデルとして使用可能かどうかを検討している。治療後におけるエクソソームの検出感度及びそのバイオマーカーとしての妥当性をまず検証できるモデル構築を検討する。また、マウスの涙採取により、エクソソーム及びRNA検出の是非を検討しており、前臨床とはなるものの、涙の検出系の強化を図っている。
胃癌腫瘍免疫微小環境における3次リンパ構造の成熟機構の解明と抗体取得
研究課題/研究課題番号:20H03752 2020年4月 - 2023年3月
科学研究費助成事業 基盤研究(B)
掛地 吉弘, 中野 秀雄, 青井 貴之, 藤田 貢, 岡田 誠治, 向山 順子, 山下 公大, 高村 史記
担当区分:研究分担者
胃癌での免疫チェックポイント阻害剤(CPi)の治療効果は十分とは言えず、CAR-T細胞療法等の次世代型新規療法の導入が望まれる。腫瘍特異的抗体の特定およびその配列情報が必須となる。近年、腫瘍近傍に出現する三次リンパ構造 (TLS)中に腫瘍特異的抗体を産生する腫瘍関連B細胞 (TAB)が多く存在することが明らかとなった。本研究では、進行胃癌のTLS 成熟度を迅速に評価すること、TABの抽出および機能解析を行うこと、胃癌特異的抗体同定プロセスを最適化することで、胃癌特異的な次世代型新規抗体医薬製品の開発につながる抗体取得を行い、進行胃癌の腫瘍微小環境を制御し、治療成績の向上を目指す。
迅速探索と機械学習を利用した単一B細胞からの機能抗体分子創生技術開発
研究課題/研究課題番号:19H02523 2019年4月 - 2023年3月
科学研究費助成事業 基盤研究(B)
中野 秀雄, ダムナニョヴィッチ ヤスミナ, 兒島 孝明
担当区分:研究代表者
配分額:17680000円 ( 直接経費:13600000円 、 間接経費:4080000円 )
請者らが開発した、無細胞タンパク質合成系を用いてB細胞1個から迅速にモノクローナル抗体(Mab)を合成・選別できるEcobody技術を用い、ハイブリドーマ法等の既存の方法では取得が困難な膜タンパク質の立体構造を認識するMabをスクリーニング技術を開発する。さらに得られた多数の配列と抗原との親和性および細胞傷害活性とのデータを利用して、インフォマティクス解析と立体構造解析を行い、優れた抗体分子の創生スキームを構築する。
申請者らが開発した、無細胞タンパク質合成系を用いてB細胞1個から迅速にモノクローナル抗体(Mab)を合成・選別できるEcobody技術を用い、ハイブリドーマ法 等の既存の方法では取得が困難な膜タンパク質の立体構造を認識するMabのスクリーニング技術を開発する。さらに得られた多数の配列と抗原との親和性および細 胞傷害活性とのデータを利用して、インフォマティクス解析と立体構造解析を行い、優れた抗体分子の創生スキームを構築することを目的に以下の実験を行っ た。
1)坑SARS-CoV-2 ヒトモノクローナル抗体を、COVID-19患者由来B細胞から複数取得し、その配列解析および特異性解析を行なった。その結果野生株特異的な抗体と、オミクロン株とに共通に結合する抗体を複数えることに成功した。2)機械学習による獲得抗体の高機能化:Ecobody法により取得した抗cAMP抗体の配列情報を基に、H鎖、L鎖におけるそれぞれ3か所のCDRのアミノ酸情報をアミノ 酸パラメータにより数値化し、説明変数、抗原結合能を目的変数として、教師あり機械学習アルゴリズム5種類で結合活性予測モデルを構築した。得られたモデルによる高い結合活性が予測された抗体を合成し、その評価を行ったところ、cAMP-BSA複合体に対する活性は見られたものの、cAMPを用いた拮抗阻害活性評価では、顕著な活性は検出されなかった。このことは元にした抗体がcAMP部分を単独では認識していないことを示唆している。
3) Fabの大量合成手法の開発:大腸菌の分泌発現系を用いて、Fab抗体として分泌発現を試みた。その結果培養上清を用いてELISAおよびウェスタンブッティングにより、活性Fabのペリプラズム分泌を確認した。
抗体配列の機械学習の研究において、使用した抗体が、cAMPだけでなくハプテン部分も結合していたため、本手法を用いることで、有用な抗体取得には至っていない。
抗SARS-Cov-2ヒト抗体の取得には成功した他、他のモノクローナル抗体も多数取得しており、より結合が特異的な抗体配列セットを用いて、これまでに確立した機械学習手法を用いて、研究を推進する。
人工リン脂質を利用した直交型リポソーム融合法の開発とその応用
研究課題/研究課題番号:19K05160 2019年4月 - 2022年3月
科学研究費助成事業 基盤研究(C)
岩崎 雄吾, 中野 秀雄
担当区分:研究分担者
脂質小胞の膜融合はリポソーム工学において重要な要素技術であるが、従来法には直交性がなく、目的とする異種小胞間での融合を選択的に達成することが困難であった。
本課題では、極性頭部を修飾した各種人工リン脂質を合成して膜小胞に埋め込み、それらの相互作用を利用して直交型異種間膜融合系を開発する。さらに、鋳型DNA封入リポソームと無細胞タンパク合成試薬封入リポソームを試験管内で直交融合させてタンパク合成を行う。本法によりリポソームへの選択的な物資供給が可能になり、膜タンパク質のリポソーム内分子進化工学などへの応用が期待できる。
本課題では、(1)極性頭部に修飾を施した人工リン脂質を合成し、それを含有するリポソームにおいてリン脂質間の共有結合による直交型融合、(2)リポソーム上に異種のタンパク質を結合させ、タンパクータンパク相互作用を利用したリポソーム融合を試み、異種間直交型融合の確立を目的とする。
<BR>
(1) クリック反応を利用して融合を試みたが、リポソーム融合を確認するには至らなかった。そこで、1対1でのリポソーム融合を実際に観察するため、既報に報告されているマイクロデバイスを作成することにした。このデバイスはスライドガラス上に仕切り板が並び両側に電極が配置されている。仕切り板を挟むようにリポソーム溶液を注入し、交流電場を印加すると、仕切り板の隙間を挟んでリポソームが一対一で接触する。そこに直流電場を印加して両者を電気融合させるものである。現在デバイスの作成が完了し、交流・直流印加装置の準備も整ったところである。
<BR>
(2) チオエステル型リン脂質を緩衝液に分散し、遊離のCysとのNCLい、脂質を抽出してLC-MSで分析したところ予想通りにNCLによりCysが結合したリン脂質の生成を確認した。次に、同様の反応をN末端Cys残基をもつGFPで行い、プロテナーゼK処理後、脂質を溶媒抽出してLC-MSで分析したところ、同様にCys結合型リン脂質の生成が認められた。この脂質はN末端Ser型GFPでは検出されなかったことから、リン脂質とN末端システイン型GFPの結合に成功したと考えられた。次にチオエステル型リン脂質を少量含むリポソームを調製し、N末端Cys型GFPとのNCLを試みた。蛍光顕微鏡観察によりリポソームの表面にGFP蛍光が観察された。一方、N末端Ser型型GFPではリポソーム上の蛍光は観察されなかった。以上のように、チオエステル型リン脂質とN末端システイン型GFPとの結合が成功した。
タンパク質をリポソーム上に固定する新規な方法を開発することができたが、依然としてリポソーム融合には成功していない。リポソーム同士が接触する過程と、それに続く融合過程を分けて考える必要がある。前者の過程は当初計画の通りリポソーム表面でのクリックあるはタンパク・タンパク相互作用で達成できると思われるが、後者の融合は電気的な融合が有効と考えられる。このため、マイクロデバイスを用いた電気融合を行う準備を行ったわけである。
マイクロデバイスの準備が完了したのこれを用いた電気融合を試みる。
その後、交流電場を用いない、本来の計画である、バルク状態での融合を試みる。
リポソーム融合にはアジドやアルキンのとリン酸基との間にある程度の距離が必要と考えられるため、リン脂質極性部にPEGスペーサーをもった人工リン脂質を新規合成し融合実験に供する。
多種抗膜タンパク質抗体の高効率な一括取得法とその分子標的治療薬評価法の一体的開発
研究課題/研究課題番号:17H03468 2017年4月 - 2021年3月
科学研究費助成事業 基盤研究(B)
冨田 昌弘, 中野 秀雄, 安川 智之, 湊元 幹太
担当区分:研究分担者
(1)立体構造特異的ターゲティング (SST) 法を用いて、膜タンパク質に対する立体構造認識モノクローナル抗体の作製に成功した。(2)単一B細胞から、直接モノクローナル抗体(mAb)を取得するEcobody法を用いて、EGFR認識ウサギmAbおよび、Swine Influenza Virus に対するウサギmAbを取得し、そのウイルス検出系を構築した。(3)マイクロ電極を組み込んだ三次元誘電泳動デバイスを開発し、細胞のアレイ化、異種細胞ペアの形成および細胞融合を達成した。(4)マイクロビーズ担持人工脂質膜へGPCR(β2AR)等を提示する手法を組換えバキュロウイルスとの膜融合技術で実現した。
(1) 生体内で独自の高次構造を保持している抗原を特異的に認識できる抗体は従来法では実現できないため、次世代の抗体医薬の開発に大きく貢献できる。(2) 従来法とは異なる単一B細胞からウサギモノクローナル抗体を取得する手法を確立し、それを膜タンパク質などに応用可能であることを示すことができた。(3) 確実な細胞ペア形成と電気パルス細胞融合により有用な抗体を産生するハイブリドーマを取得できる点に大きな意義がある。(4) 組換え産物から直接膜抗原提示する技術であり担持場の工夫により力学的安定性も得られアッセイ操作が容易であることを実演した。
近赤外光を用いた新規迅速免疫測定法の開発
2014年4月 - 2016年3月
科学研究費補助金 挑戦的萌芽研究、課題番号:26630425
中野 秀雄
担当区分:研究代表者
無細胞系ナノ構造化生物機能システムの開発
2014年4月 - 2016年3月
科学研究費補助金 特定領域研究
中野 秀雄
担当区分:研究代表者
無細胞系ギガスクリーニング法の開発と応用
2011年4月 - 2015年3月
科学研究費補助金 基盤研究(B)
中野 秀雄
担当区分:研究代表者
汎用的シグナルペプチド配列最適化法の開発
2011年4月 - 2013年3月
科学研究費補助金 挑戦的萌芽研究、課題番号:23656522
中野 秀雄
担当区分:研究代表者
免疫細胞ネットワークのデジタル解析
2007年4月 - 2010年3月
科学研究費補助金 特定領域研究(公募,A03),課題番号:19021020
中野 秀雄
担当区分:研究代表者
無細胞系分子ディスプレイシステムの構築と応用
2007年3月 - 2011年3月
科学研究費補助金 基盤研究(B)(一般),課題番号:19360373
中野 秀雄
担当区分:研究代表者
ヒトモノクローナル抗体のハイスループット取得法の開発
2007年3月 - 2009年3月
科学研究費補助金 萌芽研究,課題番号:19656218
中野 秀雄
担当区分:研究代表者
酵素の光学選択性に関与する基質認識部位の網羅的解析
2004年7月 - 2007年3月
科学研究費補助金 基盤研究(B),課題番号:16360411
中野秀雄
担当区分:研究代表者
細胞1個の遺伝情報とリンクしたプロテインアレイシステムの構築
2004年7月 - 2005年3月
科学研究費補助金 萌芽研究,課題番号:16656256
中野秀雄
担当区分:研究代表者
マイクロリアクタアレイによる超高密度タンパク質・ペプチド分子ライブラリの構築
2000年7月 - 2002年1月
科学研究費補助金 基盤研究(B)(1)(一般)
担当区分:研究代表者
科研費
ハイスループットモノクローナル抗体取得法に関する研究
2000年7月 - 2001年1月
科学研究費補助金 萌芽的研究
担当区分:研究代表者
科研費
バイオ研究支援機器としての無細胞遺伝子翻訳装置の開発
1998年7月 - 2002年1月
科学研究費補助金 基盤研究(B)(2)(展開)
担当区分:研究分担者
科研費
無細胞分子進化システムの構築
1997年7月 - 1999年1月
科学研究費補助金 基盤研究(C)(2)(一般)
担当区分:研究代表者
科研費
無細胞蛋白質合成系の効率化に関する研究
1995年1月 - 1997年12月
科学研究費補助金 一般研究(B)
担当区分:研究分担者
科研費
タグ付抗体
中野秀雄 兒島孝明 加藤晃代
特定菌検出⽅方法
加藤晃代 渕真吾 中野秀雄 田村廣人 三宅司郎
分⼦子ディスプレイ法及びその⽤用途
中野秀雄 古澤聖司
エマルジョンを利用した核酸増幅法および核酸増幅キット、
中野秀雄、武井義明、児島孝明
検査対象受体、検査装置、及び検査方法
中野秀雄 吉村千里 石鹿孝典
リガンド親和性複合蛋白質の取得方法、抗体スクリーニング方法、抗体スクリーニング用キット、医療方法、抗体医薬、非免疫反応性抗体医薬、投薬方法
中野秀雄 姜 秀ピン
タンパク質の生産方法、タンパク質のスクリーニング方法、及びタンパク質の機能検索方法
今村 千絵,高橋 治雄,中野 秀雄,山根 恒夫
Method for amplifying nucleic acid molecules and method for synthesizing proteins,"
タンパク質の合成方法
山根 恒夫, 中野 秀雄,河原崎 泰昌,関口 哲
タンパク質の合成方法
関口 哲,新畑 智也,布藤 聡,中野 秀雄,山根 恒夫
核酸分子の増幅方法
山根 恒夫,中野 秀雄,関口 哲
核酸分子の増幅方法及びタンパクの合成方法
山根 恒夫, 中野 秀雄,大内 将司, 奥村 れい子, 関口 哲
タンパクの製造方法
山根 恒夫, 中野 秀雄, 奥村 れい子,
無細胞タンパク合成系によるタンパクの合成方法及び装置
山根恒夫、中野秀雄、田中忠明、関口哲
6-ヒドロキシニコチン酸モノオキシゲナーゼ遺伝子
中野 秀雄, 川合 隆博,山根 恒夫, 長澤 透
無細胞タンパク合成系を用いたタンパクの製造法
関口 哲,船山 綾子,久保田 肇,山根 恒夫,中野 秀雄
無細胞タンパク合成系を用いたタンパクの製造法
山根恒夫、中野秀雄
DNA増幅方法及びDNA増幅装置
中野 秀雄, 山根 恒夫,長棟 輝行,養王田 正文遠藤 勲
生物反応工学
2022
生物分子工学特論
2022
応用生命科学科学生実験
2022
応用生命科学科学生実験
2021
化学基礎Ⅱ
2011
基礎セミナーB
2011
合成・生物化学特論A
2022年1月 (京都大学)
科目区分:大学院専門科目
無細胞タンパク質合成系の高機能化と応用
2004年4月 - 2005年3月 (静岡大学)
微生物工学
1996年4月 - 1997年3月 (国際工学院専門学校)
生物と工学
2018年9月 - 現在 (中部大学)
国名:日本国
バイオテクノロジー
2009年4月 - 2010年3月 (中部大学)