所属
大学院医学系研究科 総合医学専攻 頭頸部・感覚器外科学 助教
大学院担当
大学院医学系研究科
学部担当
医学部 医学科
職名
助教
フジタ コウスケ
藤田 幸輔
FUJITA Kosuke
学位 1
-
博士（農学） （ 2006年9月 岩手大学 ）
研究キーワード 3
-
遺伝子治療
-
アデノ随伴ウイルス
-
網膜
研究分野 2
-
ライフサイエンス / 眼科学
-
ライフサイエンス / 分子生物学
経歴 7
-
名古屋大学 医学系研究科 助教
2020年10月 - 現在
国名：日本国
-
東北大学 医学系研究科 助教
2018年4月 - 2020年9月
-
東北大学医学系研究科 助手
2013年4月 - 2018年3月
-
大阪大学理学研究科 特任研究員
2009年4月 - 2013年3月
-
独立行政法人農業生物資源研究所 特別研究員
2006年10月 - 2009年3月
-
博士号取得（岩手大学 連合農学研究科）
2006年10月
-
日本学術振興会 特別研究員（DC2）
2004年10月 - 2006年3月
学歴 3
-
岩手大学 連合農学研究科
2001年4月 - 2006年9月
-
岩手大学 農学研究科 応用生物学専攻
1999年4月 - 2001年3月
-
岩手大学 農学部 応用生物学科
1995年4月 - 1999年3月
所属学協会 3
-
日本神経科学学会
-
日本応用動物昆虫学会
-
日本分子生物学会
論文 46
-
Goto, K; Koyanagi, Y; Akiyama, M; Murakami, Y; Fukushima, M; Fujiwara, K; Iijima, H; Yamaguchi, M; Endo, M; Hashimoto, K; Ishizu, M; Hirakata, T; Mizobuchi, K; Takayama, M; Ota, J; Sajiki, A; Kominami, T; Ushida, H; Fujita, K; Kaneko, H; Ueno, S; Hayashi, T; Terao, C; Hotta, Y; Murakami, A; Kuniyoshi, K; Kusaka, S; Wada, Y; Abe, T; Nakazawa, T; Ikeda, Y; Momozawa, Y; Sonoda, KH; Nishiguchi, KM
JOURNAL OF MEDICAL GENETICS 61 巻 ( 7 ) 頁： 613 - 620 2024年7月
-
Mice with deficiency in Pcdh15, a gene associated with bipolar disorders, exhibit significantly elevated diurnal amplitudes of locomotion and body temperature 査読有り
Mori D, Inami C, Ikeda R, Sawahata M, Urata S, Yamaguchi ST, Kobayashi Y, Fujita K, Arioka Y, Okumura H, Kushima I, Kodama A, Suzuki T, Hirao T, Yoshimi A, Sobue A, Ito T, Noda Y, Mizoguchi H, Nagai T, Kaibuchi K, Okabe S, Nishiguchi K, Kume K, Yamada K, Ozaki N.
Transl Psychiatry 14 巻 ( 1 ) 頁： 216 2024年5月
-
Identification of OPTN p.(Asn51Thr): A novel pathogenic variant in primary open-angle glaucoma 査読有り
Yukihiro Shiga, Kazuki Hashimoto, Kosuke Fujita, Shigeto Maekawa, Kota Sato, Shintaroh Kubo, Kazuhide Kawase, Kana Tokumo, Yoshiaki Kiuchi, Sotaro Mori, Makoto Nakamura, Takeshi Iwata, Koji M. Nishiguchi, Toru Nakazawa
Genetics in Medicine Open 2 巻 頁： 100839 - 100839 2024年
-
Sajiki, A; Koyanagi, Y; Ushida, H; Kawano, K; Fujita, K; Okuda, D; Kawabe, M; Yamada, K; Suzumura, A; Kachi, S; Kaneko, H; Komatsu, H; Usui, Y; Goto, H; Nishiguchi, KM
AMERICAN JOURNAL OF OPHTHALMOLOGY 254 巻 頁： 80 - 86 2023年10月
-
Neural mechanism of experience-dependent sensory gain control in C. elegans 査読有り 国際誌
Ikejiri, Y; Tanimoto, Y; Fujita, K; Hiramatsu, F; Yamazaki, SJ; Endo, Y; Iwatani, Y; Fujimoto, K; Kimura, KD
NEUROSCIENCE RESEARCH 191 巻 頁： 77 - 90 2023年6月
-
Sato, K; Sato, T; Ohno-Oishi, M; Ozawa, M; Maekawa, S; Shiga, Y; Yabana, T; Yasuda, M; Himori, N; Omodaka, K; Fujita, K; Nishiguchi, KM; Ge, S; Nakazawa, T
EXPERIMENTAL EYE RESEARCH 213 巻 頁： 108826 - 108826 2021年12月
-
Nishiguchi Koji M., Miya Fuyuki, Mori Yuka, Fujita Kosuke, Akiyama Masato, Kamatani Takashi, Koyanagi Yoshito, Sato Kota, Takigawa Toru, Ueno Shinji, Tsugita Misato, Kunikata Hiroshi, Cisarova Katarina, Nishino Jo, Murakami Akira, Abe Toshiaki, Momozawa Yukihide, Terasaki Hiroko, Wada Yuko, Sonoda Koh-Hei, Rivolta Carlo, Tsunoda Tatsuhiko, Tsujikawa Motokazu, Ikeda Yasuhiro, Nakazawa Toru
COMMUNICATIONS BIOLOGY 4 巻 ( 1 ) 頁： 140 2021年1月
-
Companion Diagnosis for Retinal Neuroprotective Treatment by Real-Time Imaging of Calpain Activation Using a Novel Fluorescent Probe. 査読有り 国際誌
Asano T, Nagayo Y, Tsuda S, Ito A, Kobayashi W, Fujita K, Sato K, Nishiguchi KM, Kunikata H, Fujioka H, Kamiya M, Urano Y, Nakazawa T
Bioconjugate chemistry 31 巻 ( 9 ) 頁： 2241 - 2251 2020年9月
-
Serum anti-recoverin antibodies is found in elderly patients with retinitis pigmentosa and cancer. 査読有り 国際誌
Sato T, Nishiguchi KM, Fujita K, Miya F, Inoue T, Sasaki E, Asano T, Tsuda S, Shiga Y, Kunikata H, Nakazawa M, Nakazawa T
Acta ophthalmologica 98 巻 ( 6 ) 頁： e722 - e729 2020年9月
-
Association of CRX genotypes and retinal phenotypes confounded by variable expressivity and electronegative electroretinogram. 査読有り 国際誌
Nishiguchi KM, Kunikata H, Fujita K, Hashimoto K, Koyanagi Y, Akiyama M, Ikeda Y, Momozawa Y, Sonoda KH, Murakami A, Wada Y, Nakazawa T
Clinical & experimental ophthalmology 48 巻 ( 5 ) 頁： 644 - 657 2020年7月
-
A founder Alu insertion in RP1 gene in Japanese patients with retinitis pigmentosa. 査読有り
Nishiguchi KM, Fujita K, Ikeda Y, Kunikata H, Koyanagi Y, Akiyama M, Abe T, Wada Y, Sonoda KH, Nakazawa T
Japanese journal of ophthalmology 64 巻 ( 4 ) 頁： 346 - 350 2020年7月
-
Single AAV-mediated mutation replacement genome editing in limited number of photoreceptors restores vision in mice. 査読有り 国際誌
Nishiguchi KM, Fujita K, Miya F, Katayama S, Nakazawa T
Nature communications 11 巻 ( 1 ) 頁： 482 - 482 2020年1月
-
In vivo imaging of the light response in mouse retinal ganglion cells based on a neuronal activity-dependent promoter. 査読有り 国際誌
Fujita K, Nishiguchi KM, Sato K, Nakagawa Y, Nakazawa T
Biochemical and biophysical research communications 521 巻 ( 2 ) 頁： 471 - 477 2020年1月
-
Phenotypic Features of Oguchi Disease and Retinitis Pigmentosa in Patients with S-Antigen Mutations: A Long-Term Follow-up Study. 査読有り 国際誌
Nishiguchi KM, Ikeda Y, Fujita K, Kunikata H, Akiho M, Hashimoto K, Hosono K, Kurata K, Koyanagi Y, Akiyama M, Suzuki T, Kawasaki R, Wada Y, Hotta Y, Sonoda KH, Murakami A, Nakazawa M, Nakazawa T, Abe T
Ophthalmology 126 巻 ( 11 ) 頁： 1557 - 1566 2019年11月
-
Yamazaki Shuhei J., Ohara Kazuya, Ito Kentaro, Kokubun Nobuo, Kitanishi Takuma, Takaichi Daisuke, Yamada Yasufumi, Ikejiri Yosuk, Hiramatsu Fumie, Fujita Kosuke, Tanimoto Yuki, Yamazoe-Umemoto Akiko, Hashimoto Koichi, Sato Katsufumi, Yoda Ken, Takahashi Akinori, Ishikawa Yuki, Kamikouchi Azusa, Hiryu Shizuko, Maekawa Takuya, Kimura Koutarou D.
FRONTIERS IN NEUROSCIENCE 13 巻 ( JUN ) 頁： 626 - 626 2019年6月
-
Alternative methods to detect anti-TRPM1 antibodies. 査読有り 国際誌
Nishiguchi KM, Fujita K, Inoue T, Nakazawa T
Clinical & experimental ophthalmology 47 巻 ( 1 ) 頁： 148 - 149 2019年1月
-
Anti-TRPM1 antibodies in patients with retinal degeneration. 査読有り 国際誌
Nishiguchi KM, Fujita K, Inoue T, Nakazawa T
Clinical & experimental ophthalmology 46 巻 ( 9 ) 頁： 1087 - 1089 2018年12月
-
Reliable detection of low visual acuity in mice with pattern visually evoked potentials. 査読有り 国際誌
Tokashiki N, Nishiguchi KM, Fujita K, Sato K, Nakagawa Y, Nakazawa T
Scientific reports 8 巻 ( 1 ) 頁： 15948 2018年10月
-
Nishiguchi Koji M., Fujita Kosuke, Tokashiki Naoyuki, Komamura Hiroshi, Takemoto-Kimura Sayaka, Okuno Hiroyuki, Bito Haruhiko, Nakazawa Toru
MOLECULAR THERAPY 26 巻 ( 10 ) 頁： 2397 - 2406 2018年10月
-
Ecel1 Knockdown With an AAV2-Mediated CRISPR/Cas9 System Promotes Optic Nerve Damage-Induced RGC Death in the Mouse Retina. 査読有り 国際誌
Sato K, Shiga Y, Nakagawa Y, Fujita K, Nishiguchi KM, Tawarayama H, Murayama N, Maekawa S, Yabana T, Omodaka K, Katayama S, Feng Q, Tsuda S, Nakazawa T
Investigative ophthalmology & visual science 59 巻 ( 10 ) 頁： 3943 - 3951 2018年8月
-
Prevalence of anti-retinal antibodies in epiretinal membranes and macular holes. 査読有り 国際誌
Kunikata H, Fujita K, Nishiguchi KM, Nakazawa T
Clinical & experimental ophthalmology 46 巻 ( 5 ) 頁： 556 - 558 2018年7月
-
Levels of Anti-Retinal Antibodies in Retinal Detachment and Proliferative Vitreoretinopathy. 査読有り 国際誌
Ichinohasama R, Nishiguchi KM, Fujita K, Aizawa N, Inoue T, Sasaki E, Kunikata H, Nakazawa T
Current eye research 43 巻 ( 6 ) 頁： 804 - 809 2018年6月
-
The neuroprotective effect of hesperidin in NMDA-induced retinal injury acts by suppressing oxidative stress and excessive calpain activation. 査読有り 国際誌
Maekawa S, Sato K, Fujita K, Daigaku R, Tawarayama H, Murayama N, Moritoh S, Yabana T, Shiga Y, Omodaka K, Maruyama K, Nishiguchi KM, Nakazawa T
Scientific reports 7 巻 ( 1 ) 頁： 6885 2017年7月
-
Spatially and Temporally Regulated <i>NRF2</i> Gene Therapy Using <i>Mcp-1</i> Promoter in Retinal Ganglion Cell Injury. 査読有り 国際誌
Fujita K, Nishiguchi KM, Shiga Y, Nakazawa T
Molecular therapy. Methods & clinical development 5 巻 頁： 130 - 141 2017年6月
-
Calcium dynamics regulating the timing of decision-making in <i>C. elegans</i>. 査読有り 国際誌
Tanimoto Y, Yamazoe-Umemoto A, Fujita K, Kawazoe Y, Miyanishi Y, Yamazaki SJ, Fei X, Busch KE, Gengyo-Ando K, Nakai J, Iino Y, Iwasaki Y, Hashimoto K, Kimura KD
eLife 6 巻 2017年5月
-
The neuroprotective effect of latanoprost acts via klotho-mediated suppression of calpain activation after optic nerve transection. 査読有り 国際誌
Yamamoto K, Sato K, Yukita M, Yasuda M, Omodaka K, Ryu M, Fujita K, Nishiguchi KM, Machida S, Nakazawa T
Journal of neurochemistry 140 巻 ( 3 ) 頁： 495 - 508 2017年2月
-
Genetic analysis of Japanese primary open-angle glaucoma patients and clinical characterization of risk alleles near CDKN2B-AS1, SIX6 and GAS7. 査読有り 国際誌
Shiga Y, Nishiguchi KM, Kawai Y, Kojima K, Sato K, Fujita K, Takahashi M, Omodaka K, Araie M, Kashiwagi K, Aihara M, Iwata T, Mabuchi F, Takamoto M, Ozaki M, Kawase K, Fuse N, Yamamoto M, Yasuda J, Nagasaki M, Nakazawa T, Japan Glaucoma Society Omics Group (JGS-OG).
PloS one 12 巻 ( 12 ) 頁： e0186678 2017年
-
Topical ocular dexamethasone decreases intraocular pressure and body weight in rats. 査読有り
Sato K, Nishiguchi KM, Maruyama K, Moritoh S, Fujita K, Ikuta Y, Kasai H, Nakazawa T
Journal of negative results in biomedicine 15 巻 ( 1 ) 頁： 5 2016年3月
-
Analysis of Macular Drusen and Blood Test Results in 945 Macaca fascicularis. 査読有り
Nishiguchi KM, Yokoyama Y, Fujii Y, Fujita K, Tomiyama Y, Kawasaki R, Furukawa T, Ono F, Shimozawa N, Togo M, Suzuki M, Nakazawa T
PloS one 11 巻 ( 10 ) 頁： e0164899 2016年
-
Axial Spondylometaphyseal Dysplasia Is Caused by C21orf2 Mutations. 査読有り
Wang Z, Iida A, Miyake N, Nishiguchi KM, Fujita K, Nakazawa T, Alswaid A, Albalwi MA, Kim OH, Cho TJ, Lim GY, Isidor B, David A, Rustad CF, Merckoll E, Westvik J, Stattin EL, Grigelioniene G, Kou I, Nakajima M, Ohashi H, Smithson S, Matsumoto N, Nishimura G, Ikegawa S
PloS one 11 巻 ( 3 ) 頁： e0150555 2016年
-
Measurement of Electroretinograms and Visually Evoked Potentials in Awake Moving Mice. 査読有り
Tomiyama Y, Fujita K, Nishiguchi KM, Tokashiki N, Daigaku R, Tabata K, Sugano E, Tomita H, Nakazawa T
PloS one 11 巻 ( 6 ) 頁： e0156927 2016年
-
In vivo cellular imaging of various stress/response pathways using AAV following axonal injury in mice. 査読有り
Fujita K, Nishiguchi KM, Yokoyama Y, Tomiyama Y, Tsuda S, Yasuda M, Maekawa S, Nakazawa T
Scientific reports 5 巻 頁： 18141 2015年12月
-
Modulation of different behavioral components by neuropeptide and dopamine signalings in non-associative odor learning of Caenorhabditis elegans. 査読有り
Yamazoe-Umemoto A, Fujita K, Iino Y, Iwasaki Y, Kimura KD
Neuroscience research 99 巻 頁： 22 - 33 2015年10月
-
BmEts upregulates promoter activity of lebocin in Bombyx mori. 査読有り
Tanaka H, Sagisaka A, Fujita K, Furukawa S, Ishibashi J, Yamakawa M
Insect biochemistry and molecular biology 42 巻 ( 7 ) 頁： 474 - 81 2012年7月
-
A novel method to convert a DNA fragment inserted into a plasmid to an inverted repeat structure. 査読有り
Tomimoto K, Fujita K, Ishibashi J, Imanishi S, Yamakawa M, Tanaka H
Molecular biotechnology 50 巻 ( 1 ) 頁： 18 - 27 2012年1月
-
Enhancement of odor avoidance regulated by dopamine signaling in Caenorhabditis elegans. 査読有り
Kimura KD, Fujita K, Katsura I
The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience 30 巻 ( 48 ) 頁： 16365 - 75 2010年12月
-
Expression profiling of novel bacteria-induced genes from the silkworm, Bombyx mori. 査読有り
Tanaka H, Suzuki N, Nakajima Y, Sato M, Sagisaka A, Fujita K, Ishibashi J, Imanishi S, Mita K, Yamakawa M
Archives of insect biochemistry and physiology 73 巻 ( 3 ) 頁： 148 - 62 2010年3月
-
Genome-wide analysis of host gene expression in the silkworm cells infected with Bombyx mori nucleopolyhedrovirus. 査読有り
Sagisaka A, Fujita K, Nakamura Y, Ishibashi J, Noda H, Imanishi S, Mita K, Yamakawa M, Tanaka H
Virus research 147 巻 ( 2 ) 頁： 166 - 75 2010年2月
-
DNA vector-based RNA interference in cell lines derived from Bombyx mori. 査読有り
Fujita K, Sagisaka A, Tomimoto K, Ishibashi J, Imanishi S, Yamakawa M, Tanaka H
Bioscience, biotechnology, and biochemistry 73 巻 ( 9 ) 頁： 2026 - 31 2009年9月
-
Correlation of differential expression of silkworm antimicrobial Peptide genes with different amounts of rel family proteins and their gene transcriptional activity. 査読有り
Tanaka H, Sagisaka A, Nakajima Y, Fujita K, Imanishi S, Yamakawa M
Bioscience, biotechnology, and biochemistry 73 巻 ( 3 ) 頁： 599 - 606 2009年3月
-
shRNA expression plasmids generated by a novel method efficiently induce gene-specific knockdown in a silkworm cell line. 査読有り
Tanaka H, Fujita K, Sagisaka A, Tomimoto K, Imanishi S, Yamakawa M
Molecular biotechnology 41 巻 ( 2 ) 頁： 173 - 9 2009年2月
-
Lipopolysaccharide elicits expression of immune-related genes in the silkworm, Bombyx mori 査読有り
H. Tanaka, A. Sagisaka, K. Fujita, Y. Kaneko, S. Imanishi, M. Yamakawa
INSECT MOLECULAR BIOLOGY 18 巻 ( 1 ) 頁： 71 - 75 2009年2月
-
A genome-wide analysis of genes and gene families involved in innate immunity of Bombyx mori. 査読有り
Tanaka H, Ishibashi J, Fujita K, Nakajima Y, Sagisaka A, Tomimoto K, Suzuki N, Yoshiyama M, Kaneko Y, Iwasaki T, Sunagawa T, Yamaji K, Asaoka A, Mita K, Yamakawa M
Insect biochemistry and molecular biology 38 巻 ( 12 ) 頁： 1087 - 110 2008年12月
-
A chitinase structurally related to the glycoside hydrolase family 48 is indispensable for the hormonally induced diapause termination in a beetle. 査読有り
Fujita K, Shimomura K, Yamamoto K, Yamashita T, Suzuki K
Biochemical and biophysical research communications 345 巻 ( 1 ) 頁： 502 - 7 2006年6月
-
A Double Chaperone Function of the sHsp Genes against Heat-Based Environmental Adversity in the Soil-Dwelling Leaf Beetles 査読有り
Atungulu Elizabeth, Tanaka Hiromasa, Fujita Kosuke, Yamamoto Kei-ichiro, Sakata Mutsumi, Sato Erika, Hara Michihiro, Yamashita Tetsuro, Suzuki Koichi
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｓｅｃｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｓｅｒｉｃｏｌｏｇｙ 75 巻 ( 1 ) 頁： 15 - 22 2006年
-
Ojima Noriyuki, Ikeda Shin-ichi, Koike Osamu, FUJITA Kosuke, SUZUKI Koichi
Applied entomology and zoology 40 巻 ( 1 ) 頁： 119 - 124 2005年2月
書籍等出版物 1
-
耐性の昆虫学 第23章 休眠による微生物環境への耐性機構
藤田幸輔, 鈴木幸一
東海大学出版会 2008年6月
MISC 8
-
新規開発蛍光プローブを用いたカルパイン活性の生体内イメージング 国際誌
浅野俊文, 津田聡, 伊藤梓, 佐藤孝太, 藤田幸輔, 國方彦志, 神谷真子, 浦野泰照, 中澤徹
日本緑内障学会抄録集29th 巻 頁： 127 2018年
-
津田聡, 津田聡, 浅野俊文, 伊藤梓, 佐藤孝太, 藤田幸輔, 國方彦志, 神谷真子, 浦野泰照, 中澤徹
日本緑内障学会抄録集29th 巻 頁： 128 2018年
-
パスウェイ特異的プロモーターを用いた網膜神経節細胞ストレス応答のin vivoイメージング
藤田 幸輔, 西口 康二, 横山 悠, 富山 優介, 津田 聡, 安田 正幸, 中澤 徹
日本生化学会大会・日本分子生物学会年会合同大会講演要旨集88回・38回 巻 頁： [4T18p - 11(3P1293)] 2015年12月
-
パスウェイ特異的レポーターによる網膜神経節細胞ストレス応答のin vivoイメージング
西口 康二, 藤田 幸輔, 藤井 裕介, 山本 耕太郎, 津田 聡, 安田 正幸, 中澤 徹
日本眼科学会雑誌119 巻 ( 臨増 ) 頁： 244 - 244 2015年3月
-
Enhancement of odor avoidance regulated by dopamine signaling in the nematode C-elegans
Kotaro Kimura, Kosuke Fujita, Yosuke Miyanishi, Akiko Yamazoe
JOURNAL OF PHYSIOLOGICAL SCIENCES60 巻 頁： S73 - S73 2010年
-
Identifying the site of dopamine action for regulating experience-dependent odor avoidance in the nematode C. elegans
Kosuke Fujita, Kotaro Kimura
NEUROSCIENCE RESEARCH68 巻 頁： E402 - E402 2010年
-
田中博光, 石橋純, 藤田幸輔, 勾坂晶, 中島由郎, 芳山三喜雄, 冨本和也, 金子陽一, 岩崎崇, 砂川智哉, 朝岡愛, 三田和英, 山川稔
生化学 頁： 1P-0696 2008年
-
鈴木 幸一, 楊 平, 田中 弘正, 藤田 幸輔
蚕糸・昆虫バイオテック75 巻 ( 1 ) 頁： 3 - 9 2006年4月
共同研究・競争的資金等の研究課題 1
-
網膜変性に対するPrime editingを用いた革新的ゲノム編集遺伝子治療の開発
2021年1月 - 2022年3月
堀科学芸術振興財団 研究費助成事業
配分額：1000000円
科研費 6
-
エピゲノム編集による抹消血を用いた網膜色素変性病因遺伝子の発現解析法の開発
研究課題/研究課題番号：20K09765 2020年4月 - 2023年3月
基盤研究(C)
西口 康二
担当区分：研究分担者 資金種別：競争的資金
配分額：100000円 （ 直接経費：100000円 ）
網膜色素変性（RP）患者由来の不死化リンパ球を対象に、ゲノム編集技術を用いて特定のRP病因遺伝子のプロモーターを非メチル化することにより同遺伝子の強制発現細胞株の樹立を可能にする技術を開発する。この細胞株を用いて、本来リンパ球では発現しないRP病因遺伝子のmRNA発現解析を行い、同患者のゲノム情報と照合することにより、逆算的に病因変異が同定可能か検証する。このアプローチの有用性が明らかになった場合、比較的簡便かつ安価な遺伝子診断補助検査法の開発が可能になり、遺伝性疾患の診断率の向上に寄与すると期待される。
-
網膜疾患関連遺伝子の機能解析のための新規CRISPR-Cas9ベクターの開発
研究課題/研究課題番号：18K09395 2018年4月 - 2021年3月
基盤研究(C)
藤田 幸輔
担当区分：研究代表者 資金種別：競争的資金
配分額：4420000円 （ 直接経費：3400000円 、 間接経費：1020000円 ）
近年、遺伝子解析技術の発展により眼疾患の遺伝的背景が急速に解明されつつある。しかし、同定された多くの疾患関連遺伝子の機能解析が十分になされていない。一方、近年、効率的な遺伝子機能解析手法としてCRISPR-Cas9システムによるゲノム編集が注目されている。これを用いて短時間かつin vivoで網膜神経細胞における遺伝子機能を評価する場合、アデノ随伴ウイルス（AAV）を用いてターゲット細胞にシステムを導入することになるが、AAVは搭載可能なインサートサイズが小さいという難点がある。本研究は、CRISPR-Cas9システムによるゲノム編集に必要な各パーツを小型化することにより１つのAAV上に搭載したAll-in-one AAVベクターを作製し、網膜細胞を対象に効率的な遺伝子機能解析を可能にする技術開発を目的とする。
初年度は、視細胞特異的な小型プロモーターを開発し、それを組み込んだAll-in-oneゲノム編集用AAVを作製した。ゲノム編集を効果的に判定するために、視細胞変性モデルマウスを用いて、ゲノム編集による病因変異の正常化とそれによる治療効果を検討した。
当該年度は、引き続きゲノム編集による治療効果を詳細に解析・検討した。その結果、開発したAll-in-one ゲノム編集AAVベクターにより、マウス視細胞の病因変異がおよそ10%正常に修復されたことを明らかにした。その効果について組織学的、電気生理学的、行動学的に視機能を評価したところ、従来の遺伝子治療と同程度にまで視力が回復したことが示された。加えて、オフターゲット効果が生じていないことも確認し、有用な遺伝子治療ツールとなりうることを示した。
本研究は効率的な遺伝子機能解析の大幅な効率化とともに、遺伝子治療への応用も期待できるものである。
当該年度はAll-in-one AAVベクターの作製を行い、年度後半からマウス網膜でのゲノム編集効果の評価に取り組む計画であった。現在までのところ、開発したAll-in-one AAVベクターを用いて視細胞のゲノム編集による遺伝子治療を行い、視機能回復に成功した。以上のように、既に遺伝子治療まで可能なAll-in-one AAVベクターが完成している。これは遺伝子機能解析にも有用である。現段階において、研究を進める上で大きな問題はなく、おおむね順調に進展していると評価した。
今後はゲノム編集効率の向上に取り組み、より効果的なゲノム編集ツールの開発を行っていく。ゲノム編集効率の向上が見込まれる薬剤の検討や、AAVベクターの改変を行い、培養細胞を用いた系により評価する。選定した改良型AAVベクターをマウス網膜に導入し、編集効果を解析していく。
また、網膜の他の細胞種を標的にしたゲノム編集ＡＡＶベクターの開発も同時に行っていく。 -
錐体系視覚と杆体系視覚の可塑性の比較
研究課題/研究課題番号：16K11315 2016年4月 - 2019年3月
基盤研究(C)
西口 康二
担当区分：研究分担者 資金種別：競争的資金
配分額：300000円 （ 直接経費：300000円 ）
先天的に錐体機能・杆体機能の両方が欠落しているPde6c、Gnat1両欠損マウスは生まれつきほぼ全盲である。様々な月齢のマウスに対してGNAT1遺伝子治療を施行して、杆体視細胞の治療を行い、その視覚回復に対する影響を検討した。その結果、生後１、3、9か月でGNAT1遺伝子治療を施行したマウスで、回復した網膜機能と視覚領野レベルの視覚に差がなかった。しかも、視覚領野レベルの遺伝子治療後の視機能は、Pde6c欠損マウスの視機能と有意差がなかった。
以上より、成体マウスにおいても杆体系視覚は十分な可塑性を有していることが明らかになった。
近年、先天的に視覚障害をもつ網膜変性症患者に対して、遺伝子治療が試みられている。しかし、この治療では、網膜感度は改善されるが、視力は向上しない。その原因として、視覚の可塑性の欠落が考えられる。本研究では、「先天性網膜変性症に対する治療では、視覚再建に有効な感受性期が、杆体系視覚と錐体系視覚とでは異なる」との仮説を立て、その検証した。その結果、驚くべきことに、成体マウスにおいては、杆体系の視覚は非常に高い可塑性を有することが初めて明らかになった。 -
網膜神経節細胞の障害応答性遺伝子治療の開発
研究課題/研究課題番号：16K20301 2016年4月 - 2018年3月
若手研究（B)
藤田 幸輔
担当区分：研究代表者 資金種別：競争的資金
配分額：3900000円 （ 直接経費：3000000円 、 間接経費：900000円 ）
網膜神経節細胞（RGC）障害が病気の本態である緑内障は視覚に重篤な影響を及ぼす。多くの場合、慢性で緩急を伴い、空間的に偏った病態の進行を示す。そこで、空間・時間特異度の高い新規遺伝子治療プラットフォームの開発を目指した。RGC障害時に転写が亢進するストレス応答プロモーターの下流に治療遺伝子を搭載したAAVベクターを作製し、恒常的に転写されるCMVプロモーターと治療効率を比較したところ、視神経挫滅モデルにおいて同等の治療効果を示した。正常マウスを用いた長期毒性試験では、CMVプロモーターにのみRGCの減少が確認された。本治療コンセプトは、眼の内外のあらゆる慢性疾患の治療に有用である可能性がある。
-
神経活動依存的プロモーターを用いた網膜神経節細胞機能のイメージング法の確立
研究課題/研究課題番号：16K15730 2016年4月 - 2018年3月
挑戦的萌芽研究
中澤 徹
担当区分：研究分担者 資金種別：競争的資金
配分額：150000円 （ 直接経費：150000円 ）
緑内障等の多くの眼疾患で網膜神経節細胞（RGC）障害により不可逆的視機能の損失を来す。病態解明のため、RGC機能を高い精度で評価するin vivo実験系の確立を目指した。神経活動依存性に活性化されるE-SAREの下流に蛍光タンパク質遺伝子を組み込んだAAVベクターを作製し、マウスに投与後、暗順応と光暴露を行い、共焦点走査型レーザー検眼鏡で観察、定量した。光暴露後2時間でin vivoで光応答するRGCが可視化された。一方、光暴露後2時間の暗順応で陽性細胞が45％減少した。E-SAREとAAVを組み合わせることにより、光応答するGCをin vivoで可視化する事に成功した。
-
RNAiを用いた緑内障に関連する神経保護機能遺伝子の探索・同定
研究課題/研究課題番号：25893015 2013年8月 - 2015年3月
研究活動スタート支援
藤田 幸輔
担当区分：研究代表者
配分額：2730000円 （ 直接経費：2100000円 、 間接経費：630000円 ）
緑内障は視神経の特徴的な構造的・機能的異常をきたす疾患であり、中途失明の原因の第一位を占めている。そこで、神経損傷・保護に機能する遺伝子とその分子機構の探索・同定を行った。
網羅的発現解析（Yasuda et al., 2014）から得られた遺伝子をターゲットとしてRNAiおよび過剰発現等のアデノ随伴ウイルスベクターを用いて緑内障モデルを用いた解析を行ったところ、網膜神経節細胞の細胞死パスウェイにおいて小胞体ストレスが関与していることが示唆された。本研究により、緑内障をはじめとした難治性網膜疾患がもたらす神経損傷の分子機構の解明と神経保護薬の開発につながることが期待される。
産業財産権 2
-
単一のＡＡＶベクターによるゲノム編集を用いた遺伝子治療
西口康二, 中澤徹, 藤田幸輔
-
外来DNA断片由来の逆方向反復配列を含む組換えベクター及びその作製方法
田中 博光, 冨本 和也, 藤田 幸輔, 山川 稔